Contenido de péptido frente a pureza: qué hay en el vial
Un vial de 5 mg no contiene 5 mg de péptido. Contraiones y agua residual componen el resto, y en trabajo cuantitativo eso importa.
Un vial etiquetado como 5 mg no contiene 5 mg de péptido. Contiene 5 mg de material liofilizado, del que el péptido es una fracción: típicamente entre el 70 y el 90 por ciento. En trabajo cualitativo rara vez importa. En cualquier trabajo cuantitativo es la diferencia entre un resultado y un artefacto.
Qué más hay en el vial
Tres cosas comparten la masa con el péptido:
- Contraiones. Los péptidos se purifican por HPLC en fase inversa con ácido trifluoroacético, y salen de esa columna como sales de TFA. Cada residuo básico —lisina, arginina, histidina— puede llevar un contraión. En una secuencia rica en ellos, solo el TFA puede suponer del 10 al 20 por ciento de la masa.
- Agua residual. La liofilización retira la mayor parte del agua, no toda. Suele quedar un pequeño porcentaje ligado, y aumenta si un vial se ha abierto en frío y ha captado humedad.
- Disolvente residual y sales de la purificación, normalmente una contribución menor.
Por qué TFA en concreto
El trifluoroacetato es el agente estándar de pareamiento iónico en purificación de péptidos porque da picos estrechos y se evapora con facilidad. La contrapartida es que queda unido al péptido, y no es inerte: el TFA tiene efectos documentados en cultivo celular a concentraciones que pueden alcanzarse simplemente disolviendo un péptido en forma de sal de TFA.
Por eso existe material intercambiado a acetato y por eso cuesta más. Si un protocolo implica células y es sensible, conviene conocer el contraión en lugar de suponerlo.
Cómo se mide el contenido de péptido
En los certificados aparecen dos métodos:
- Análisis de aminoácidos (AAA): el material se hidroliza a aminoácidos libres y se cuantifica. Es el método de referencia y da una cifra absoluta.
- Determinación de nitrógeno: se mide el nitrógeno total y se retrocalcula desde la secuencia. Más barato, algo menos específico.
Ninguno equivale a la pureza por HPLC, y esa distinción causa la mayor parte de la confusión. La pureza es una proporción; el contenido es una masa. Una muestra puede ser 99 por ciento pura y 80 por ciento péptido en masa a la vez, sin contradicción: el 99 por ciento describe qué fracción del material peptídico es la secuencia diana, y el 75 por ciento qué fracción del polvo es péptido siquiera.
Qué significa en la práctica
| Etiqueta | 5 mg de liofilizado |
|---|---|
| Pureza por HPLC | 99 % |
| Contenido de péptido | 80 % |
| Péptido real | ~4 mg |
| Concentración en 2 ml | ~2 mg/ml, no 2,5 |
Un error del 20 por ciento en la concentración basta y sobra para desplazar una curva dosis-respuesta. Si el estudio es cuantitativo, pedir el contenido de péptido y calcular a partir de esa cifra y no de la etiqueta.
Qué preguntar a un proveedor
- ¿El certificado indica el contenido de péptido además de la pureza por HPLC?
- ¿El material es sal de TFA o de acetato?
- ¿El contenido se midió por análisis de aminoácidos o por nitrógeno?
Un proveedor que no pueda responder a la primera pregunta está dando un número que no ha medido. Nuestra guía del certificado cubre qué más debe figurar en el documento, y la calculadora de reconstitución se encarga de los cálculos una vez tienes la cifra real.
Cada lote que suministramos lo analiza un laboratorio independiente para pureza por HPLC e identidad por espectrometría de masas, con certificados vinculados al lote a petición.
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