Peptidgehalt gegen Reinheit: was im Fläschchen ist
Ein 5-mg-Fläschchen enthält keine 5 mg Peptid. Gegenionen und Restwasser machen den Rest aus, und für quantitative Arbeit zählt das.
Ein mit 5 mg etikettiertes Fläschchen enthält keine 5 mg Peptid. Es enthält 5 mg lyophilisiertes Material, von dem das Peptid ein Anteil ist — typischerweise 70 bis 90 Prozent. Für qualitative Arbeit spielt das selten eine Rolle. Für alles Quantitative ist es der Unterschied zwischen einem Ergebnis und einem Artefakt.
Was sonst im Fläschchen ist
Drei Dinge teilen sich die Masse mit dem Peptid:
- Gegenionen. Peptide werden per Umkehrphasen-HPLC mit Trifluoressigsäure aufgereinigt und verlassen diese Säule als TFA-Salze. Jeder basische Rest — Lysin, Arginin, Histidin — kann ein Gegenion tragen. Bei einer daran reichen Sequenz kann TFA allein 10 bis 20 Prozent der Masse ausmachen.
- Restwasser. Die Lyophilisation entfernt das meiste Wasser, nicht alles. Einige Prozent bleiben typischerweise gebunden, und es wird mehr, wenn ein Fläschchen kalt geöffnet wurde und Feuchtigkeit gezogen hat.
- Restlösungsmittel und Salze aus der Aufreinigung, meist ein kleinerer Beitrag.
Warum ausgerechnet TFA
Trifluoracetat ist das übliche Ionenpaarreagenz in der Peptidaufreinigung, weil es scharfe Peaks liefert und leicht verdampft. Der Preis dafür ist, dass es am Peptid gebunden bleibt, und es ist nicht inert: TFA hat dokumentierte Effekte in der Zellkultur bei Konzentrationen, die schon durch das Auflösen eines TFA-Salz-Peptids erreicht werden können.
Deshalb gibt es acetatgetauschtes Material, und deshalb kostet es mehr. Umfasst ein Protokoll Zellen und ist es empfindlich, sollte man das Gegenion kennen statt es anzunehmen.
Wie der Peptidgehalt gemessen wird
Auf Zertifikaten erscheinen zwei Methoden:
- Aminosäureanalyse (AAA) — das Material wird zu freien Aminosäuren hydrolysiert und quantifiziert. Das ist die Referenzmethode und liefert einen absoluten Wert.
- Stickstoffbestimmung — der Gesamtstickstoff wird gemessen und aus der Sequenz zurückgerechnet. Billiger, etwas weniger spezifisch.
Keine von beiden ist dasselbe wie HPLC-Reinheit, und diese Unterscheidung verursacht den größten Teil der Verwirrung. Reinheit ist ein Verhältnis; Gehalt ist eine Masse. Eine Probe kann zugleich 99 Prozent rein und zu 80 Massenprozent Peptid sein, ohne Widerspruch — die 99 Prozent beschreiben, welcher Anteil des Peptidmaterials die Zielsequenz ist, und die 75 Prozent, welcher Anteil des Pulvers überhaupt Peptid ist.
Was das praktisch bedeutet
| Etikett | 5 mg Lyophilisat |
|---|---|
| HPLC-Reinheit | 99 % |
| Peptidgehalt | 80 % |
| Tatsächliches Peptid | ~4 mg |
| Konzentration in 2 ml | ~2 mg/ml, nicht 2,5 |
Ein Konzentrationsfehler von 20 Prozent genügt bei Weitem, um eine Dosis-Wirkungs-Kurve zu verschieben. Ist eine Studie quantitativ, den Peptidgehalt anfordern und daraus rechnen, nicht vom Etikett.
Was einen Anbieter zu fragen ist
- Weist das Zertifikat neben der HPLC-Reinheit auch den Peptidgehalt aus?
- Ist das Material ein TFA-Salz oder ein Acetatsalz?
- Wurde der Gehalt per Aminosäureanalyse oder über Stickstoff bestimmt?
Ein Anbieter, der die erste Frage nicht beantworten kann, nennt eine Zahl, die er nicht gemessen hat. Unser Zertifikatsleitfaden behandelt, was sonst auf das Dokument gehört, und der Rekonstitutionsrechner übernimmt die Rechnerei, sobald man den echten Wert hat.
Jede Charge, die wir liefern, wird von einem unabhängigen Labor auf HPLC-Reinheit und massenspektrometrische Identität analysiert; chargenbezogene Zertifikate auf Anfrage.
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