Seringas, filtros e tubos: consumíveis para trabalhar com péptidos
A escolha de membrana, o volume morto e os plásticos de baixa adsorção não são acessórios. Os errados retiram péptido sem deixar rasto.
A reconstituição exige poucos consumíveis, e as escolhas entre eles não são arbitrárias. Escolher mal introduz contaminação, partículas ou perda de péptido em superfícies — e nada disso se manifesta como um erro evidente.
Seringas e agulhas
Para transferir solvente para um frasco e retirar solução, o que conta é a resolução das graduações e o volume morto.
- As graduações devem ajustar-se ao volume medido. Medir 0,3 ml numa seringa de 5 ml é estimar. Usar a seringa mais pequena em que o volume caiba.
- O volume morto — o líquido retido no cone e na agulha depois de o êmbolo tocar o fundo — pode ser uma fração apreciável de uma transferência pequena. Os modelos de baixo volume morto reduzem-no.
- O calibre da agulha importa sobretudo para a rolha. Uma agulha fina faz um orifício menor, pelo que a rolha de um frasco multiuso volta a selar melhor. O coring — arrancar um fragmento de borracha para dentro — reduz-se picando em ângulo, com o bisel para cima.
As seringas devem ser de utilização única. Reutilizá-las entre compostos é a forma mais simples de contaminar de forma cruzada toda uma série de trabalho.
Filtração esterilizante
A filtração por membrana de 0,22 µm remove bactérias e partículas de uma solução. Duas coisas que não faz: não remove endotoxina, muito menor do que o tamanho de poro, nem agregados abaixo do corte.
A escolha de membrana importa mais do que se supõe, porque os péptidos adsorvem a alguns materiais:
| Membrana | Ligação de proteína/péptido | Notas |
|---|---|---|
| PES (polietersulfona) | Baixa | Primeira escolha habitual para soluções aquosas de péptido |
| PVDF | Baixa | Boa compatibilidade química |
| Acetato de celulose | Baixa | Bom em aquoso, fraca resistência a solventes |
| Nylon | Alta | Evitar — liga péptido |
| PTFE | Variável | Para solventes orgânicos |
A concentrações diluídas, a perda por adsorção num filtro pode ser uma fração significativa do material. Quando a concentração é baixa e a esterilidade indispensável, pré-lavar ou pré-saturar o filtro é prática corrente.
A filtração acrescenta ainda uma interface ar-líquido e corte, ambos promotores de agregação. Vale a pena quando o protocolo exige esterilidade, e não vale a pena por precaução.
Tubos e adsorção
Os péptidos aderem ao plástico e ao vidro. Acima de cerca de 0,1 mg/ml a perda é normalmente desprezável; abaixo não é, e o efeito agrava-se com maior razão superfície/volume, pelo que as alíquotas pequenas são as mais afetadas.
- Polipropileno de baixa adsorção para soluções diluídas.
- Vidro silanizado quando for necessário vidro.
- O poliestireno comum é a pior opção habitual para péptido diluído.
Frascos e rolhas
Vidro âmbar para sequências fotossensíveis — as que contêm triptofano, tirosina ou fenilalanina. As rolhas de borracha butílica são o padrão e voltam a selar razoavelmente após uma picada fina; picadas repetidas no mesmo ponto acabam por falhar.
Limpar a rolha com álcool antes de cada picada e deixar secar. Álcool arrastado para o frasco por uma rolha húmida é um solvente que não pretendia adicionar.
Em que vale a pena gastar
Por ordem: tubos de baixa adsorção se trabalhar diluído, seringas do tamanho adequado e a membrana correta se filtrar. O resto é material corrente.
O nosso guia de reconstituição cobre o procedimento, o guia de diluentes a água, e o artigo sobre endotoxinas por que a filtração não substitui um ensaio.
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