Stříkačky, filtry a zkumavky: spotřební materiál pro práci s peptidy
Volba membrány, mrtvý objem a plasty s nízkou vazbou nejsou vedlejší. Ty nesprávné odeberou peptid, aniž by zanechaly stopu.
Rekonstituce vyžaduje malý počet spotřebního materiálu a volby mezi nimi nejsou libovolné. Zvolit špatně znamená kontaminaci, částice nebo ztrátu peptidu na površích — a nic z toho se neprojeví jako zjevná chyba.
Stříkačky a jehly
Při přenosu rozpouštědla do vialky a odběru roztoku jsou podstatné rozlišení stupnice a mrtvý objem.
- Stupnice by měla odpovídat měřenému objemu. Měřit 0,3 ml na 5ml stříkačce je odhad. Použij nejmenší stříkačku, do které se objem vejde.
- Mrtvý objem — kapalina zadržená v hrdle a jehle po dosednutí pístu — může tvořit významný podíl malého přenosu. Konstrukce s nízkým mrtvým objemem ho snižují.
- Průměr jehly je důležitý zejména pro zátku. Tenčí jehla dělá menší díru, takže zátka vícenásobně používané vialky se lépe uzavře. Vyřezávání — vytlačení kousku gumy do vialky — se sníží vpichem pod úhlem se zkosením nahoru.
Stříkačky by měly být jednorázové. Jejich opakované používání napříč sloučeninami je nejjednodušší způsob, jak křížově kontaminovat celou sérii práce.
Sterilní filtrace
Filtrace přes membránu 0,22 µm odstraní z roztoku bakterie a částice. Dvě věci nedělá: neodstraní endotoxin, který je mnohem menší než velikost pórů, a neodstraní agregáty pod hranicí.
Na volbě membrány záleží víc, než většina lidí čeká, protože peptidy se na některé materiály adsorbují:
| Membrána | Vazba proteinů/peptidů | Poznámky |
|---|---|---|
| PES (polyethersulfon) | Nízká | Obvyklá první volba pro vodné peptidové roztoky |
| PVDF | Nízká | Dobrá chemická kompatibilita |
| Acetát celulózy | Nízká | Dobrý pro vodné, slabá odolnost vůči rozpouštědlům |
| Nylon | Vysoká | Vyhnout se — váže peptid |
| PTFE | Proměnlivá | Pro organická rozpouštědla |
Při zředěných koncentracích může adsorpční ztráta na filtru tvořit významný podíl materiálu. Kde je koncentrace nízká a sterilita nezbytná, je běžnou praxí filtr předem propláchnout nebo nasytit.
Filtrace zároveň přidává rozhraní vzduch–kapalina a smykové napětí, obojí podporuje agregaci. Vyplatí se dělat ji, když protokol vyžaduje sterilitu, a nevyplatí se dělat ji preventivně.
Zkumavky a adsorpce
Peptidy se lepí na plast a sklo. U roztoků nad přibližně 0,1 mg/ml je ztráta obvykle zanedbatelná, pod tím ne, a efekt je horší při vyšším poměru povrchu k objemu — což znamená, že nejvíc postižené jsou malé alikvoty.
- Polypropylen s nízkou vazbou pro zředěné roztoky.
- Silanizované sklo, kde je sklo potřeba.
- Obyčejný polystyren je nejhorší běžnou možností pro zředěný peptid.
Vialky a zátky
Jantarové sklo pro sekvence citlivé na světlo — ty s tryptofanem, tyrosinem nebo fenylalaninem. Butylkaučukové zátky jsou standard a po vpichu tenkou jehlou se uzavřou rozumně; opakované vpichy do téhož místa nakonec selžou.
Zátku před každým vpichem otři alkoholem a nech uschnout. Alkohol přenesený do vialky na mokré zátce je rozpouštědlo, které jsi přidat nechtěl.
Na co se vyplatí utratit
V pořadí: zkumavky s nízkou vazbou při práci se zředěnými roztoky, přiměřeně velké stříkačky a správná membrána filtru, pokud vůbec filtruješ. Vše ostatní je běžné zboží.
Náš návod na rekonstituci pokrývá postup, průvodce rozpouštědly vodu a článek o endotoxinech to, proč filtrace nenahradí testování.
All products and information referenced are for in-vitro research and laboratory use only. Nothing here is medical advice, and no therapeutic claim is made or implied.