Jeringas, filtros y tubos: consumibles para trabajar con péptidos
La elección de membrana, el volumen muerto y los plásticos de baja adsorción no son accesorios. Los equivocados retiran péptido sin dejar rastro.
La reconstitución requiere unos pocos consumibles, y las elecciones entre ellos no son arbitrarias. Elegir mal introduce contaminación, partículas o pérdida de péptido en superficies, y nada de eso se manifiesta como un error evidente.
Jeringas y agujas
Para transferir disolvente a un vial y extraer disolución, lo relevante es la resolución de las graduaciones y el volumen muerto.
- Las graduaciones deben ajustarse al volumen medido. Medir 0,3 ml en una jeringa de 5 ml es estimar. Usar la jeringa más pequeña en la que quepa el volumen.
- El volumen muerto —el líquido retenido en el cono y la aguja cuando el émbolo toca fondo— puede ser una fracción apreciable de una transferencia pequeña. Los diseños de bajo volumen muerto lo reducen.
- El calibre de la aguja importa sobre todo por el tapón. Una aguja fina hace un orificio menor, así que el tapón de un vial multiuso resella mejor. El coring —arrancar un fragmento de goma hacia el interior— se reduce pinchando en ángulo, con el bisel hacia arriba.
Las jeringas deben ser de un solo uso. Reutilizarlas entre compuestos es la forma más sencilla de contaminar de forma cruzada toda una serie de trabajo.
Filtración esterilizante
La filtración por membrana de 0,22 µm retira bacterias y partículas de una disolución. Dos cosas que no hace: no retira endotoxina, mucho menor que el tamaño de poro, ni agregados por debajo del corte.
La elección de membrana importa más de lo que se supone, porque los péptidos se adsorben a algunos materiales:
| Membrana | Unión de proteína/péptido | Notas |
|---|---|---|
| PES (polietersulfona) | Baja | Primera opción habitual para disoluciones acuosas de péptido |
| PVDF | Baja | Buena compatibilidad química |
| Acetato de celulosa | Baja | Buena en acuoso, mala resistencia a disolventes |
| Nailon | Alta | Evitar: une péptido |
| PTFE | Variable | Para disolventes orgánicos |
A concentraciones diluidas, la pérdida por adsorción en un filtro puede ser una fracción significativa del material. Cuando la concentración es baja y la esterilidad imprescindible, prelavar o presaturar el filtro es práctica habitual.
La filtración añade además una interfase aire-líquido y cizalla, ambas promotoras de agregación. Merece la pena cuando el protocolo exige esterilidad, y no merece la pena como precaución.
Tubos y adsorción
Los péptidos se pegan al plástico y al vidrio. Por encima de unos 0,1 mg/ml la pérdida suele ser despreciable; por debajo no, y el efecto empeora con mayor relación superficie/volumen, de modo que las alícuotas pequeñas son las más afectadas.
- Polipropileno de baja adsorción para disoluciones diluidas.
- Vidrio silanizado cuando se requiera vidrio.
- El poliestireno común es la peor opción habitual para péptido diluido.
Viales y tapones
Vidrio ámbar para secuencias fotosensibles: las que contienen triptófano, tirosina o fenilalanina. Los tapones de caucho butilo son el estándar y resellan razonablemente tras un pinchazo fino; pinchazos repetidos en el mismo punto acaban fallando.
Limpiar el tapón con alcohol antes de cada pinchazo y dejar secar. El alcohol arrastrado al vial por un tapón húmedo es un disolvente que no querías añadir.
En qué merece la pena gastar
Por orden: tubos de baja adsorción si se trabaja diluido, jeringas de tamaño adecuado y la membrana correcta si se filtra. Todo lo demás es material corriente.
Nuestra guía de reconstitución cubre el procedimiento, la guía de diluyentes el agua, y el artículo sobre endotoxinas por qué la filtración no sustituye a un ensayo.
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