Co ve skutečnosti znamená „5 mg“ na vialce peptidu
Etiketa uvádí hrubou hmotnost lyofilizátu. Protiionty a zbytková voda jsou její součástí a ten výpočet se vyplatí udělat jednou.
Vialka označená 5 mg neobsahuje 5 mg peptidu. Není to trik ani specifikum některého dodavatele — je to důsledek toho, jak se peptidy vyrábějí a jak se vialky plní, a ten výpočet se vyplatí udělat jednou.
Na co se číslo na etiketě vztahuje
Uvedené množství je hrubá hmotnost lyofilizátu — celková hmotnost pevné látky ve vialce. Ta pevná látka není čistý peptid. Obsahuje, v sestupném pořadí:
- Samotný peptid
- Protiionty, obvykle trifluoracetát z purifikace. Typicky 5–20 % hmotnosti, rostoucí s počtem bazických zbytků v sekvenci
- Zbytková voda, pár procent i po důkladném sušení
- Stopové zbytkové rozpouštědlo
Podíl, který je skutečně peptidem, se nazývá obsah peptidu a u běžného výzkumného peptidu se pohybuje někde mezi 75 a 90 procenty.
Výpočet
Vezmi 5mg vialku s 99% HPLC čistotou a 82% obsahem peptidu:
- Hrubý lyofilizát: 5,0 mg
- Přítomný peptid: 5,0 × 0,82 = 4,1 mg
- Z toho správný peptid: 4,1 × 0,99 = 4,06 mg
Údaj o 99% čistotě je přesný a etiketa je přesná. Prostě odpovídají na různé otázky — čistota se ptá, jaký podíl přítomného peptidu je ten správný, obsah se ptá, jaký podíl hmotnosti ve vialce je peptid.
Kdy na tom záleží a kdy ne
U kvalitativní práce — dělá sloučenina to, co má, vůbec — rozdíl deset až dvacet procent ve skutečné hmotnosti zřídka mění závěr.
U kvantitativní práce — křivky dávka–odpověď, stanovení IC50, cokoli, kde je koncentrace měřenou proměnnou — jde o systematickou chybu přesně této velikosti, aplikovanou na každý bod. Opakováním se nevyruší a v datech nebude viditelná.
Záleží-li na přesnosti koncentrace, vyžádej si hodnotu obsahu peptidu. Pochází ze samostatného testu — aminokyselinové analýzy nebo stanovení dusíku — a ne každý dodavatel si ho objedná. To, zda umějí odpovědět, je samo o sobě informativní.
Tolerance plnění
Druhý, menší zdroj odchylky. Vialky se plní podle hmotnosti nebo objemu roztoku před lyofilizací a ani jedno není přesné. Tolerance několika procent jsou normální a nejsou vadou.
Praktickým důsledkem je, že vialka označená 5 mg může obsahovat 4,9 nebo 5,1 mg lyofilizátu ještě před jakýmkoli výpočtem obsahu. U většiny práce je to zanedbatelné; u té nejpřesnější je odpovědí vážení, a to vyžaduje analytické váhy a suchou manipulaci, ne etiketu.
Jak porovnávat dodavatele správně
Cena za vialku je jako porovnání téměř bezvýznamná. Dvě 10mg vialky za stejnou cenu jsou různé produkty, má-li jedna 90 % peptidu a druhá 75 %.
Srovnatelnou hodnotou jsou náklady na miligram peptidu:
náklady na mg peptidu = cena ÷ (hmotnost ve vialce × obsah peptidu × čistota)Většina dodavatelů obsah peptidu nezveřejňuje, což znamená, že u většiny porovnání pracuješ se dvěma ze tří čísel. Vyplatí se to vědět, ne to obcházet — a je to další důvod, proč ochota odpovědět na konkrétní analytickou otázku rozlišuje dodavatele spolehlivěji než jejich weby.
Náš článek o obsahu versus čistotě rozebírá rozdíl podrobně, článek o protiiontech to, odkud pochází hmotnost navíc, a článek o cenách to, co náklady určuje.
All products and information referenced are for in-vitro research and laboratory use only. Nothing here is medical advice, and no therapeutic claim is made or implied.