Što „5 mg" na bočici doista znači
Bruto masa liofilizata, sadržaj peptida i tolerancija punjenja — račun koji vrijedi napraviti jednom te ispravna formula za usporedbu dobavljača.
Bočica označena s 5 mg ne sadrži 5 mg peptida. To nije trik i nije vezano ni uz jednog dobavljača — posljedica je toga kako se peptidi proizvode i kako se bočice pune, a račun vrijedi napraviti jednom.
Na što se odnosi broj na naljepnici
Navedena je količina bruto masa liofilizata — ukupna masa krutine u bočici. Ta krutina nije čist peptid. Sadrži, silaznim redom:
- Sam peptid
- Protuione, obično trifluoroacetat iz pročišćavanja. Obično 5–20 posto mase, rastući s brojem bazičnih ostataka u sekvenci
- Zaostalu vodu, nekoliko posto i nakon temeljitog sušenja
- Zaostalo otapalo u tragovima
Udio koji je doista peptid naziva se sadržaj peptida i za tipičan istraživački peptid kreće se negdje između 75 i 90 posto.
Račun
Uzmite bočicu od 5 mg pri 99 posto HPLC čistoće i 82 posto sadržaja peptida:
- Bruto liofilizat: 5,0 mg
- Prisutan peptid: 5,0 × 0,82 = 4,1 mg
- Od čega ispravan peptid: 4,1 × 0,99 = 4,06 mg
Brojka od 99 posto čistoće točna je i naljepnica je točna. Jednostavno odgovaraju na različita pitanja — čistoća pita koji je udio prisutnog peptida onaj pravi, a sadržaj koji je udio mase bočice peptid.
Kad je to važno, a kad nije
Za kvalitativni rad — radi li spoj uopće ono što treba — razlika od deset ili dvadeset posto u stvarnoj masi rijetko mijenja zaključak.
Za kvantitativni rad — krivulje doza-odgovor, određivanje IC50, sve gdje je koncentracija mjerena varijabla — riječ je o sustavnoj pogrešci točno te veličine, primijenjenoj na svaku točku. Neće se prosječiti ponavljanjem i neće biti vidljiva u podacima.
Ako je točnost koncentracije bitna, zatražite vrijednost sadržaja peptida. Dolazi iz zasebnog testa — analize aminokiselina ili određivanja dušika — i ne naručuje ga svaki dobavljač. To mogu li odgovoriti samo je po sebi informacija.
Tolerancija punjenja
Drugi, manji izvor promjenjivosti. Bočice se pune po masi ili po volumenu otopine prije liofilizacije, a nijedno nije točno. Tolerancije od nekoliko posto normalne su i nisu nedostatak.
Praktična je posljedica da bočica označena s 5 mg može sadržavati 4,9 ili 5,1 mg liofilizata prije nego što se uopće primijeni račun o sadržaju. Za većinu je rada to zanemarivo; za najprecizniji rad odgovor je vaganje, a vaganje traži analitičku vagu i suho rukovanje, a ne naljepnicu.
Kako ispravno usporediti dobavljače
Cijena po bočici kao usporedba gotovo je besmislena. Dvije bočice od 10 mg po istoj cijeni različiti su proizvodi ako je jedna 90 posto peptida, a druga 75.
Usporediva je veličina trošak po miligramu peptida:
trošak po mg peptida = cijena ÷ (masa bočice × sadržaj peptida × čistoća)Većina dobavljača ne objavljuje sadržaj peptida, što znači da za većinu usporedbi radite s dvjema od tri brojke. To vrijedi znati, a ne zaobilaziti — i to je još jedan razlog zašto spremnost na odgovor na konkretno analitičko pitanje razdvaja dobavljače pouzdanije od njihovih mrežnih stranica.
Naš članak o sadržaju i čistoći detaljno obrađuje tu razliku, članak o protuionima odakle dolazi dodatna masa, a članak o cijenama što pokreće trošak.
All products and information referenced are for in-vitro research and laboratory use only. Nothing here is medical advice, and no therapeutic claim is made or implied.