Co naprawdę znaczy „5 mg" na fiolce
Masa brutto liofilizatu, zawartość peptydu i tolerancja napełniania — arytmetyka, którą warto przeliczyć raz, oraz właściwy wzór na porównanie dostawców.
Fiolka z etykietą 5 mg nie zawiera 5 mg peptydu. To nie podstęp i nie kwestia konkretnego dostawcy — to konsekwencja tego, jak peptydy się wytwarza i jak napełnia fiolki, a arytmetykę warto przeliczyć raz.
Do czego odnosi się liczba na etykiecie
Podana ilość to masa brutto liofilizatu — całkowita masa ciała stałego w fiolce. To ciało stałe nie jest czystym peptydem. Zawiera, w kolejności malejącej:
- Sam peptyd
- Przeciwjony, zwykle trifluorooctan z oczyszczania. Zwykle 5–20 procent masy, rosnąc wraz z liczbą reszt zasadowych w sekwencji
- Wodę resztkową, kilka procent nawet po dokładnym suszeniu
- Śladowy rozpuszczalnik resztkowy
Ułamek będący faktycznie peptydem nazywa się zawartością peptydu i dla typowego peptydu badawczego mieści się gdzieś między 75 a 90 procent.
Arytmetyka
Weź fiolkę 5 mg o czystości HPLC 99 procent i zawartości peptydu 82 procent:
- Liofilizat brutto: 5,0 mg
- Obecny peptyd: 5,0 × 0,82 = 4,1 mg
- Z czego właściwy peptyd: 4,1 × 0,99 = 4,06 mg
Liczba 99 procent czystości jest prawdziwa i etykieta jest prawdziwa. Po prostu odpowiadają na różne pytania — czystość pyta, jaki ułamek obecnego peptydu jest tym właściwym, a zawartość, jaki ułamek masy fiolki stanowi peptyd.
Kiedy to ma znaczenie, a kiedy nie
Przy pracy jakościowej — czy związek w ogóle robi to, co ma robić — różnica dziesięciu czy dwudziestu procent w rzeczywistej masie rzadko zmienia wniosek.
Przy pracy ilościowej — krzywych dawka–odpowiedź, wyznaczaniu IC50, wszystkim, gdzie mierzoną zmienną jest stężenie — to błąd systematyczny dokładnie tej wielkości, nałożony na każdy punkt. Nie uśredni się przy powtórzeniach i nie będzie widoczny w danych.
Jeśli dokładność stężenia ma znaczenie, poproś o wartość zawartości peptydu. Pochodzi z osobnego oznaczenia — analizy aminokwasowej albo oznaczenia azotu — i nie każdy dostawca je zleca. To, czy potrafią odpowiedzieć, samo w sobie jest informacją.
Tolerancja napełniania
Drugie, mniejsze źródło zmienności. Fiolki napełnia się według masy albo objętości roztworu przed liofilizacją i żadne z nich nie jest dokładne. Tolerancje rzędu kilku procent są normalne i nie stanowią wady.
Praktyczna konsekwencja: fiolka z etykietą 5 mg może zawierać 4,9 albo 5,1 mg liofilizatu, zanim jeszcze zastosuje się arytmetykę zawartości. Dla większości prac jest to pomijalne; przy pracach najbardziej precyzyjnych odpowiedzią jest ważenie, a ważenie wymaga wagi analitycznej i pracy w warunkach suchych, a nie etykiety.
Jak poprawnie porównywać dostawców
Cena za fiolkę jest jako porównanie niemal bez znaczenia. Dwie fiolki po 10 mg w tej samej cenie to różne produkty, jeśli jedna ma 90 procent peptydu, a druga 75.
Porównywalną wielkością jest koszt na miligram peptydu:
koszt na mg peptydu = cena ÷ (masa fiolki × zawartość peptydu × czystość)Większość dostawców nie publikuje zawartości peptydu, co oznacza, że przy większości porównań pracujesz z dwiema z trzech liczb. Warto o tym wiedzieć, zamiast to obchodzić — i to kolejny powód, dla którego gotowość odpowiedzi na konkretne pytanie analityczne odróżnia dostawców pewniej niż ich strony internetowe.
Nasz artykuł o zawartości a czystości omawia to rozróżnienie szczegółowo, artykuł o przeciwjonach to, skąd bierze się dodatkowa masa, a artykuł o cenach to, co napędza koszt.
All products and information referenced are for in-vitro research and laboratory use only. Nothing here is medical advice, and no therapeutic claim is made or implied.