Čo v skutočnosti znamená „5 mg“ na fľaštičke peptidu
Etiketa uvádza hrubú hmotnosť lyofilizátu. Protiióny a zvyšková voda sú jej súčasťou a ten výpočet sa oplatí urobiť raz.
Fľaštička označená 5 mg neobsahuje 5 mg peptidu. Nie je to trik ani špecifikum niektorého dodávateľa — je to dôsledok toho, ako sa peptidy vyrábajú a ako sa fľaštičky plnia, a ten výpočet sa oplatí urobiť raz.
Na čo sa číslo na etikete vzťahuje
Uvedené množstvo je hrubá hmotnosť lyofilizátu — celková hmotnosť pevnej látky vo fľaštičke. Tá pevná látka nie je čistý peptid. Obsahuje, v zostupnom poradí:
- Samotný peptid
- Protiióny, zvyčajne trifluóracetát z purifikácie. Typicky 5–20 % hmotnosti, rastúc s počtom bázických zvyškov v sekvencii
- Zvyšková voda, pár percent aj po dôkladnom sušení
- Stopové zvyškové rozpúšťadlo
Podiel, ktorý je skutočne peptidom, sa nazýva obsah peptidu a pri bežnom výskumnom peptide sa pohybuje niekde medzi 75 a 90 percentami.
Výpočet
Vezmi 5 mg fľaštičku s 99 % HPLC čistotou a 82 % obsahom peptidu:
- Hrubý lyofilizát: 5,0 mg
- Prítomný peptid: 5,0 × 0,82 = 4,1 mg
- Z toho správny peptid: 4,1 × 0,99 = 4,06 mg
Údaj o 99 % čistote je presný a etiketa je presná. Jednoducho odpovedajú na rôzne otázky — čistota sa pýta, aký podiel prítomného peptidu je ten správny, obsah sa pýta, aký podiel hmotnosti vo fľaštičke je peptid.
Kedy na tom záleží a kedy nie
Pri kvalitatívnej práci — robí zlúčenina to, čo má, vôbec — rozdiel desať až dvadsať percent v skutočnej hmotnosti zriedka mení záver.
Pri kvantitatívnej práci — krivky dávka–odpoveď, stanovenia IC50, čokoľvek, kde je koncentrácia meranou premennou — ide o systematickú chybu presne tejto veľkosti, aplikovanú na každý bod. Opakovaním sa nevyprieme a v dátach nebude viditeľná.
Ak na presnosti koncentrácie záleží, pýtaj si hodnotu obsahu peptidu. Pochádza zo samostatného testu — aminokyselinovej analýzy alebo stanovenia dusíka — a nie každý dodávateľ si ho objedná. To, či vedia odpovedať, je samo osebe informatívne.
Tolerancia plnenia
Druhý, menší zdroj odchýlky. Fľaštičky sa plnia podľa hmotnosti alebo objemu roztoku pred lyofilizáciou a ani jedno nie je presné. Tolerancie niekoľkých percent sú normálne a nie sú chybou.
Praktickým dôsledkom je, že fľaštička označená 5 mg môže obsahovať 4,9 alebo 5,1 mg lyofilizátu ešte pred akýmkoľvek výpočtom obsahu. Pri väčšine práce je to zanedbateľné; pri tej najpresnejšej je odpoveďou váženie, a to vyžaduje analytické váhy a suchú manipuláciu, nie etiketu.
Ako porovnávať dodávateľov správne
Cena za fľaštičku je ako porovnanie takmer bezvýznamná. Dve 10 mg fľaštičky za rovnakú cenu sú rôzne produkty, ak jedna má 90 % peptidu a druhá 75 %.
Porovnateľnou hodnotou sú náklady na miligram peptidu:
náklady na mg peptidu = cena ÷ (hmotnosť vo fľaštičke × obsah peptidu × čistota)Väčšina dodávateľov obsah peptidu nezverejňuje, čo znamená, že pri väčšine porovnaní pracuješ s dvomi z troch čísel. Oplatí sa to vedieť, nie to obchádzať — a je to ďalší dôvod, prečo ochota odpovedať na konkrétnu analytickú otázku rozlišuje dodávateľov spoľahlivejšie než ich weby.
Náš článok o obsahu verzus čistote rozoberá rozdiel podrobne, článok o protiiónoch to, odkiaľ pochádza hmotnosť navyše, a článok o cenách to, čo náklady určuje.
Všetky uvádzané produkty a informácie sú určené výhradne na in-vitro výskum a laboratórne použitie. Nič z uvedeného nie je lekárska rada a nepredstavuje ani nenaznačuje žiadne terapeutické tvrdenie.