Striekačky, filtre a skúmavky: spotrebný materiál pre prácu s peptidmi
Voľba membrány, mŕtvy objem a plasty s nízkou väzbou nie sú vedľajšie. Tie nesprávne odoberú peptid bez toho, aby zanechali stopu.
Rekonštitúcia si vyžaduje malý počet spotrebného materiálu a voľby medzi nimi nie sú ľubovoľné. Zvoliť zle znamená kontamináciu, častice alebo stratu peptidu na povrchoch — a nič z toho sa neprejaví ako zjavná chyba.
Striekačky a ihly
Pri prenose rozpúšťadla do fľaštičky a odbere roztoku sú podstatné rozlíšenie stupnice a mŕtvy objem.
- Stupnica by mala zodpovedať meranému objemu. Merať 0,3 ml na 5 ml striekačke je odhad. Použi najmenšiu striekačku, do ktorej sa objem zmestí.
- Mŕtvy objem — kvapalina zadržaná v hrdle a ihle po dosadnutí piestu — môže tvoriť významný podiel malého prenosu. Konštrukcie s nízkym mŕtvym objemom ho znižujú.
- Priemer ihly je dôležitý najmä pre zátku. Tenšia ihla robí menšiu dieru, takže zátka viacnásobne používanej fľaštičky sa lepšie uzavrie. Vyrezávanie — vytlačenie kúska gumy do fľaštičky — sa zníži vpichom pod uhlom so skosením nahor.
Striekačky by mali byť jednorazové. Ich opakované používanie naprieč zlúčeninami je najjednoduchší spôsob, ako skrížene kontaminovať celú sériu práce.
Sterilná filtrácia
Filtrácia cez membránu 0,22 µm odstráni z roztoku baktérie a častice. Dve veci nerobí: neodstráni endotoxín, ktorý je oveľa menší než veľkosť pórov, a neodstráni agregáty pod hranicou.
Na voľbe membrány záleží viac, než väčšina ľudí čaká, lebo peptidy sa na niektoré materiály adsorbujú:
| Membrána | Väzba proteínov/peptidov | Poznámky |
|---|---|---|
| PES (polyétersulfón) | Nízka | Zvyčajná prvá voľba pre vodné peptidové roztoky |
| PVDF | Nízka | Dobrá chemická kompatibilita |
| Acetát celulózy | Nízka | Dobrý pre vodné, slabá odolnosť voči rozpúšťadlám |
| Nylon | Vysoká | Vyhnúť sa — viaže peptid |
| PTFE | Premenlivá | Pre organické rozpúšťadlá |
Pri zriedených koncentráciách môže adsorpčná strata na filtri tvoriť významný podiel materiálu. Kde je koncentrácia nízka a sterilita nevyhnutná, je bežnou praxou filter vopred prepláchnuť alebo nasýtiť.
Filtrácia zároveň pridáva rozhranie vzduch–kvapalina a šmykové napätie, oboje podporuje agregáciu. Oplatí sa robiť ju, keď protokol vyžaduje sterilitu, a neoplatí sa robiť ju preventívne.
Skúmavky a adsorpcia
Peptidy sa lepia na plast a sklo. Pri roztokoch nad približne 0,1 mg/ml je strata zvyčajne zanedbateľná, pod tým nie, a efekt je horší pri vyššom pomere povrchu k objemu — čo znamená, že najviac postihnuté sú malé alikvoty.
- Polypropylén s nízkou väzbou pre zriedené roztoky.
- Silanizované sklo, kde je sklo potrebné.
- Obyčajný polystyrén je najhoršou bežnou možnosťou pre zriedený peptid.
Fľaštičky a zátky
Jantárové sklo pre sekvencie citlivé na svetlo — tie s tryptofánom, tyrozínom alebo fenylalanínom. Butylkaučukové zátky sú štandard a po vpichu tenkou ihlou sa uzavrú rozumne; opakované vpichy do toho istého miesta nakoniec zlyhajú.
Zátku pred každým vpichom utri alkoholom a nechaj uschnúť. Alkohol prenesený do fľaštičky na mokrej zátke je rozpúšťadlo, ktoré si pridať nechcel.
Na čo sa oplatí minúť
V poradí: skúmavky s nízkou väzbou pri práci so zriedenými roztokmi, primerane veľké striekačky a správna membrána filtra, ak vôbec filtruješ. Všetko ostatné je bežný tovar.
Náš návod na rekonštitúciu pokrýva postup, sprievodca rozpúšťadlami vodu a článok o endotoxínoch to, prečo filtrácia nenahradí testovanie.
Všetky uvádzané produkty a informácie sú určené výhradne na in-vitro výskum a laboratórne použitie. Nič z uvedeného nie je lekárska rada a nepredstavuje ani nenaznačuje žiadne terapeutické tvrdenie.