Potrošni materijal za rad s peptidima: šprice, filtri i epruvete
Najlonska membrana veže peptid, obični polistiren gubi razrijeđene otopine, a filtracija ne uklanja endotoksin. Što odabrati i zašto.
Rekonstitucija traži malen broj potrošnog materijala, a izbori među njima nisu proizvoljni. Pogreška unosi onečišćenje, čestice ili gubitak peptida na površinama — a nijedno se od toga ne pokazuje kao očita greška.
Šprice i igle
Za prijenos otapala u bočicu i izvlačenje otopine bitna su dva svojstva: razlučivost podjeljaka i mrtvi volumen.
- Podjeljci trebaju odgovarati volumenu koji se mjeri. Mjerenje 0,3 ml špricom od 5 ml je nagađanje. Koristite najmanju špricu koja prima taj volumen.
- Mrtvi volumen — tekućina zadržana u nastavku i igli nakon što klip dosjedne — može biti znatan udio malog prijenosa. Izvedbe s malim mrtvim prostorom ga smanjuju.
- Debljina igle bitna je uglavnom zbog čepa. Tanja igla čini manju rupu, pa se čep višekratne bočice bolje zatvara. Iskrojavanje — utiskivanje komadića gume u bočicu — smanjuje se ubodom pod kutom, kosinom prema gore.
Šprice trebaju biti jednokratne. Ponovna uporaba između spojeva najjednostavniji je način unakrsnog onečišćenja cijelog niza rada.
Sterilizirajuća filtracija
Filtracija kroz membranu od 0,22 µm uklanja iz otopine bakterije i čestice. Dvije stvari ne radi: ne uklanja endotoksin, koji je daleko manji od pora, i ne uklanja agregate ispod granice.
Izbor membrane važniji je nego što većina očekuje, jer se peptidi adsorbiraju na neke materijale:
| Membrana | Vezanje bjelančevina/peptida | Napomene |
|---|---|---|
| PES (polietersulfon) | Nisko | Uobičajen prvi izbor za vodene otopine peptida |
| PVDF | Nisko | Dobra kemijska kompatibilnost |
| Celulozni acetat | Nisko | Dobar za vodene, slaba otpornost na otapala |
| Najlon | Visoko | Izbjegavati — veže peptid |
| PTFE | Promjenjivo | Za organska otapala |
Pri niskim koncentracijama adsorpcijski gubitak na filtru može biti znatan udio materijala. Kad je koncentracija niska, a sterilnost nužna, standard je prethodno ispiranje ili zasićivanje filtra.
Filtracija dodaje i granicu zrak–tekućina te smicanje, a oboje potiče agregaciju. Vrijedi je raditi kad protokol traži sterilnost, a ne vrijedi je raditi za svaki slučaj.
Epruvete i adsorpcija
Peptidi se lijepe na plastiku i staklo. Za otopine iznad otprilike 0,1 mg/ml gubitak je obično zanemariv; ispod toga nije, a učinak je gori pri višem omjeru površine i volumena — što znači da su mali alikvoti najpogođeniji.
- Polipropilen niskog vezanja za razrijeđene otopine.
- Silanizirano staklo ondje gdje je staklo nužno.
- Obični polistiren najgora je uobičajena opcija za razrijeđeni peptid.
Bočice i čepovi
Jantarno staklo za sekvence osjetljive na svjetlo — one koje sadrže triptofan, tirozin ili fenilalanin. Čepovi od butilne gume standard su i nakon uboda tankom iglom razumno se zatvaraju; opetovani ubodi na istom mjestu na kraju popuštaju.
Prije svakog uboda obrišite čep alkoholom i pustite da se osuši. Alkohol unesen u bočicu na mokrom čepu otapalo je koje niste namjeravali dodati.
Na što vrijedi potrošiti
Redom: epruvete niskog vezanja ako radite razrijeđeno, šprice odgovarajuće veličine i prava membrana filtra ako uopće filtrirate. Sve je ostalo roba široke potrošnje.
Naš vodič za rekonstituciju pokriva postupak, vodič za otapala vodu, a članak o endotoksinima zašto filtracija ne zamjenjuje ispitivanje.
All products and information referenced are for in-vitro research and laboratory use only. Nothing here is medical advice, and no therapeutic claim is made or implied.